| E.coli BL21來源于B株，為lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表達的外源蛋白質在該體系中具有更高的穩(wěn)定性。本制品有利于外源蛋白質的穩(wěn)定表達。本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白質表達，但不適合于啟動子為T7的蛋白質表達體系，如pET系列，因為BL21宿主不表達T7 RNA聚合酶。另外，不建議使用此菌株構建或制備質粒，因為它不是recA基因缺失型菌株。注意：本制品不可用于電擊法轉化。 ■ 保存-80℃。注意：如果不是-80℃保存，轉化效率將會降低。可使用附帶的pUC19 DNA確認保存細胞的轉化效率。不能液氮保存。 ■ 質量控制轉入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的選擇培養(yǎng)基進行篩選。轉化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA ■ GenotypeE.coli BL21: F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm ■ 注意事項1. 將感受態(tài)細胞從-80℃冷凍取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。2. 當使用100 μl感受態(tài)細胞時，加入不超過10 ng的高純度質粒DNA。否則轉化效率會降低。3. 當改變感受態(tài)細胞數量或tubes類型時，適當調整反應條件。4. 使用TE buffer溶解純化的質粒DNA。DNA溶液如果鹽濃度高，可能會降低轉化效率。5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時，轉化效率可能會降低。 ·L-broth :Ingredientper liter water Tryptone10 g Yeast extract5 g NaCl5 g 用1 N NaOH調整pH到7.5并高壓滅菌。 ·φb-broth:Ingredientper liter water Tryptone20 g Yeast extract5 g MgSO4·7H2O5 g 用1 N KOH調整pH到7.5并高壓滅菌。6. 稀釋時，使用SOC培養(yǎng)基。7. 不建議將解凍的感受態(tài)細胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結不可避免，將細胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉化效率可能會降低至少一個數量級。 |
