百迪成骨誘導分化+染色試劑盒Kit
- 品名： 百迪成骨誘導分化+染色試劑盒Kit
- 型號： S1021-KIT
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. MSC 成骨誘導完全培養(yǎng)基配制：室溫融化成骨誘導添加物 B，將融化的溶液加入人間充質(zhì)干細胞成骨誘導基礎培養(yǎng)基中，充分混勻，2-8 ℃保存，有效期 1 個月。 2. 培養(yǎng)皿處理：加適量包被溶液到培養(yǎng)器皿中，輕輕搖動使其覆蓋整個培養(yǎng)器皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液 ，室溫晾干（包被液使用前必須進行室溫復溫。建議使用六孔板，每孔加包被溶液1 ml）。 3. 準備所需誘導分化的 MSC，當細胞融合達 85%左右時，用消化液消化細胞，并用 MSC 完全培養(yǎng)基重懸（MSC 完全培養(yǎng)基需自備）。 4. 按照2×104 cells/cm2的密度將細胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔MSC完全培養(yǎng)基2 ml，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（細胞密度為該試劑盒的標準密度，可根據(jù)實驗室情況進行調(diào)整）。 5. 當細胞融合達60%時，棄去培養(yǎng)上清，每孔添加MSC成骨誘導完全培養(yǎng)基2 ml/孔，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 6. 每3天更換新鮮的MSC成骨誘導完全培養(yǎng)基，持續(xù)培養(yǎng)2-4周。細胞狀態(tài)良好一般5天后培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁，鈣渾濁為鈣開始沉積，此時換液應盡量輕柔，避免將沉積的鈣棄掉；7-10天左右出現(xiàn)鈣沉積。一般2周內(nèi)出現(xiàn)較大的較厚的鈣沉積，透光性變差。有些細胞鈣沉積出現(xiàn)較晚，一般不超過3周，超過3周未出現(xiàn)明顯沉積，請注意分析操作步驟與其他原因?？筛鶕?jù)具體實驗需求選擇終止時間，但不易超過4周（具體時間請根據(jù)自己實驗室細胞等條件自行確定）。 7. 誘導培養(yǎng)結束時，棄去培養(yǎng)上清，DPBS洗細胞兩次，4%中性多聚甲醛溶液2 ml/孔室溫固定細胞20分鐘（培養(yǎng)結束時或中途可以選擇其他檢測方法，如基因表達檢測等）。 8. 棄去固定液，DPBS洗2次，加入茜素紅染液1 ml/孔染色15分鐘。 9. 棄去茜素紅染液，DPBS洗3次，添加新鮮DPBS。 10. 顯微鏡下觀察并拍照。 11. 結果判定：按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見紅色著色點，此處為鈣結節(jié)，說明實驗所用的MSC具有成骨能力。否則，所使用的MSC無成骨能力。 |
| 注意事項 | 1、 成骨誘導后細胞易脫壁，換液時完全培養(yǎng)基必須經(jīng)室溫復溫 30 分鐘。添加培養(yǎng)基時動作要輕柔，沿培養(yǎng)器皿側(cè)壁緩緩加入，切記避免吹起細胞。 2、 染色過程中一定要避免組織細胞被風干，風干會影響顯微觀察效果。 3、 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應立即停止使用。 4、 應嚴格按照貯存要求貯存，避免反復凍融。 5、 操作過程應在無菌環(huán)境下進行。必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細胞液的器具嚴格無菌。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
間充質(zhì)干細胞（MSC）具有多向分化的潛能，在一定條件下可以體外誘導分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞，是 MSC 鑒定的必檢項目，在多種組織來源和制作方法的 MSC 藥品質(zhì)量控制中，成骨、成脂、成軟骨也是必檢指標。BDBIO 成骨誘導分化染色試劑盒可用于鑒定人 MSC 是否具有成骨分化能力，滿足 MSC 質(zhì)量控制的要求，此外在再生醫(yī)學和組織工程研究中，誘導培養(yǎng)基也可作為除支架以外的培養(yǎng)體系。誘導培養(yǎng)基還可用于研究誘導分化過程中的其他檢測，如 mRNA 檢測、lncRNA 檢測、microRNA 檢測、蛋白表達檢測、鈣沉積量檢測、免疫組化檢測等。
暫無內(nèi)容...
